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離心機分離技術要點總結
發布時間:2021-08-20瀏覽次數:32

從相關文獻可知,離心機的離心分離方法仍以其分離范圍廣、容量大的優勢存在,它可以研究天然生物大分子的流體力學特性;生物大分子的片段分離可以在電離介質中進行;對緩沖液的限制很小(由于電泳技術中電流的熱效應限制了緩沖液的使用)等等。此外,離心法廣泛應用于各種實驗方法的預處理階段??紤]到設備在各個研究部門的分布,離心分離在許多條件下被廣泛使用。差速離心、速率區密度梯度離心和等密度離心作為有效的分離純化方法,在生物大分子的研究中也發揮著重要作用。

 離心機分離要點:

  1) 防止污染:

  為了避免實驗過程中生物大分子部分損傷引起的降解或變性,導致降解的原因有很多,比如實驗過程中的外力;有些酶污染等等,但最常見的原因是酶的作用。

  在實驗中,一些脫氫酶被污染到樣品中,使生物大分子變性。

(2) 避免變性的其他注意事項:

 ?。╥)轉頭在離心前預冷到接近離心溫度(在冰箱中放置過夜,或在恒溫箱中保溫)。對于超速離心機,其制冷系統主要用于抵消轉頭在稀薄空氣中高速運轉(轉頭表面線速度從亞因速—>超因速)時氣動力摩擦產生的熱量。在真空中,只有輻射傳熱的情況下,高速運轉的轉頭溫度從室溫(如夏天30~35℃)降到5℃時間很長(如1 小時左右)一般應預冷到接近離心溫度(±2℃)以確保在離心的最初階段(15 分鐘以內)轉頭溫度和樣品溫度一致。

 ?。╥i)用固定角式或近垂直管轉頭或垂直管轉頭作梯度離心時必須利用離心機的慢加速(0~500rpm )、慢減速(500rpm~0)功能,以保證梯度方向的順利轉換。

 ?。╥ii)離心開始、離心結束都要小心地輕放和輕取離心管,避免大的震動。

 ?。╥v)卸樣過程應在無震動的實驗臺上進行,環境溫度和離心溫度相近,卸樣方法應選擇平穩、外力作用很小的方式,盡可能不用泵輸送樣品。

  3) 梯度離心也有其相關要點,這一塊內容相對復雜,要參考很多文獻資料,感興趣得朋友可以自行去了解一下:

 ?。?)B.D.Hames "Choice of Conditions for Density Gradient Centrifugation"IRL press.oxford 1984

 ?。?)M.Dobrota,R.Hinton "Conditions for density gradient Separations" Oxford University press .1992

 ?。?)D.RickWood,B.D.hames "Centrifugation,Essential Data" Wiley press.1994

 ?。?)C.A.Price "Centrifngation in density gradients"Academic press.New York 1982

 ?。?)余興明,"質粒DNA的超速離心分離""生命的化學"1994.1

 ?。?)余興明"血清脂蛋白的離心分離""生命的化學"1997.3

 ?。?)余興明"離心技術"設備與方法概論上海生物物理學會1986,1993年)。

  以上是關于離心機的簡單說明。離心機雖然只是一個很小的分離設備,但它的功能和價值是很大的,所以有必要多了解離心機,才能發現它的功能和價值!



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